Articles

Metody inhibice telomerázy | Selva's website

4.1. Metody inhibice terc katalytické podjednotky telomerázy

terc katalytická podjednotka byla hlavním cílem pro vývoj protinádorových metod z důvodu vysoké koncentrace terc téměř ve všech rakovinných buňkách, závislosti většiny rakovinných buněk na aktivitě terc a nedostatku terc ve většině normálních buněk. Přístup transkriptu knockdown využil antisense oligodeoxyribonukleotidy jako základ, zatímco novější pokroky se spoléhaly na molekuly RNA (siRNA) s malou interferencí. Obě tyto techniky zahrnují syntetické nukleové kyseliny, které se mohou vázat na specifické cíle mRNA a obě byly účinné v protinádorových přístupech k exprese knockdown terc, jak je popsáno v kapitole 2. Použití dvouvláknové RNA (dsRNA)bylo také docela účinné při ablaci nebo výrazném snížení transkriptů z genů, jako je terc (viz kapitola 3). Tyto sekvence dsRNA mohou být použity k vytvoření odpovědi RNAi v buňkách embryonálního původu, jako jsou buňky lidských embryonálních ledvin (HEK), populární typ buněk používaný při výzkumu rakoviny. Tato technika je zvláště účinná pro krátkodobé analýzy terc knockdown, protože dsRNA je dlouhodobě degradována v buňkách. RNAi terc byl také úspěšný s použitím plasmidových konstruktů, které exogenně exprimují krátké vlásenky RNA sekvence komplementární k terc transkriptu. Tato technika (Viz kapitola 4) umožňuje analýzu následných účinků terc, slouží jako alternativní přístup k genové terapii pomocí virových vektorů a umožňuje dlouhodobé a trvalé vyřazení genu. Také efektivní pro dlouhodobé knockdown terc je použití retrovirových vektorů, které exprimují krátkou vlásenku RNA specifickou pro segment transkriptu terc. Tato technika založená na RNAi (Viz kapitola 5) zahrnuje začlenění anti-telomerázové sekvence do hostitelského genomu a může poskytnout efektivní knockdown terc.

malé molekuly, jako je 3′ – azido-2′, 3′ – dideoxythymin (AZT), což je nukleosidový analog, mohou být účinné při cílení na aktivní místo terc, ale tento přístup postrádá požadovanou selektivitu mnoha dalších přístupů. Malé nenukleosidické syntetické sloučeniny mohou být docela účinné při inhibici katalytické aktivity proteinové složky terc, jak je popsáno v kapitole 6. Jedna sloučenina, která v tomto ohledu prokázala slib, je BIBR1532, která inhibuje in vitro procesivitu telomerázy. Inhibice aktivity terc s BIBR1532 se vyskytuje v závislosti na dávce a vyšší koncentrace tohoto inhibitoru telomerázy mohou být cytotoxické pro rakovinné buňky hematopoetického systému, jako jsou buňky HL-60, s malým účinkem na normální buňky.

protinádorové imunoterapeutické přístupy se také zaměřily na terc (viz kapitola 7). Tyto metody zahrnují použití peptidů odvozených od terc. Peptidy jsou prezentovány hlavními molekulami histokompatibilního komplexu (MHC) třídy i na T lymfocyty. Výsledkem je, že CD8 + cytotoxické T lymfocyty specifické pro antigenní peptidy odvozené od terc lýzují rakovinné buňky, které exprimují terc. Tyto imunoterapeutické přístupy namířené proti terc epitopům mohou být prováděny v nepřítomnosti toxicity a vykazují velký slib jako protinádorová činidla.

může být výzvou identifikovat sloučeniny s malými molekulami, které ovlivňují expresi terc, a použití buněčných reportérských systémů pro analýzu exprese terc bylo vyvinuto pro posílení těchto snah, jak je popsáno v kapitole 8. Například promotor terc může být spojen se dvěma různými reportérovými geny kódujícími zelený fluorescenční protein (GFP) a sekretovanou alkalickou fosfatázu (SEAP). Transfekce těchto reporterových konstrukcí vede ke stabilním klonům, které umožňují analýzu terc exprese. Nakonec je určitá úroveň inhibice terc cílem mnoha protinádorových přístupů a kapitoly 2-8 poskytují mnoho nejslibnějších a nejúčinnějších metod pro aktivní srazení transkriptu terc, ablaci jeho katalytické aktivity, nasměrování imunitního systému na Lyse telomerázy-pozitivní rakovinné buňky nebo použití expresních konstruktů k identifikaci složek malých molekul, které ovlivňují expresi telomerázy.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.