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Métodos de Inhibición de la Telomerasa | Selva's website

4.1. Métodos de Inhibición de la Subunidad Catalítica TERT de la Telomerasa

La subunidad catalítica TERT ha sido un objetivo importante para el desarrollo de métodos anticancerosos debido a la alta concentración de TERT en casi todas las células cancerosas, la dependencia de la mayoría de las células cancerosas de la actividad TERT y la escasez de TERT en la mayoría de las células normales. El enfoque de reducción de transcripción ha utilizado oligodesoxirribonucleótidos antisentidos como pilar, mientras que los avances más recientes se han basado en moléculas de ARN de interferencia pequeña (siRNA). Ambas técnicas involucran ácidos nucleicos sintéticos que pueden unirse a dianas específicas de ARNm y ambas han sido efectivas en enfoques anticancerosos para la expresión de TERT derribado como se describe en el Capítulo 2. El uso de ARN de doble cadena (dsRNA) también ha sido bastante efectivo para ablar o reducir en gran medida las transcripciones de genes como la TERT (ver Capítulo 3). Estas secuencias de ARND pueden utilizarse para generar una respuesta ARNi en células de origen embrionario, como las células de riñón embrionario humano (HEK), un tipo de célula popular utilizado en la investigación del cáncer. Esta técnica es especialmente eficaz para los análisis a corto plazo de la caída de TERT porque el dsRNA se degrada en las células a largo plazo. El ARNi de TERT también ha tenido éxito con el uso de construcciones de plásmidos que expresan exógenamente secuencias cortas de ARN en horquilla complementarias a la transcripción de TERT. Esta técnica (ver Capítulo 4) permite el análisis de los efectos posteriores de la TERT, sirve como un enfoque alternativo a la terapia génica utilizando vectores virales y permite el derribo génico permanente y a largo plazo. También es efectivo para el derribo a largo plazo de TERT el uso de vectores retrovirales que expresan ARN corto en horquilla específico de un segmento de la transcripción de TERT. Esta técnica basada en ARNi (ver Capítulo 5) implica la incorporación de la secuencia anti-telomerasa en el genoma del huésped y puede proporcionar un derribo efectivo de la TERT.

Las moléculas pequeñas como 3 ‘- azido-2′, 3’-dideoxitimina (AZT), que es un análogo de nucleósidos, pueden ser eficaces para dirigirse al sitio activo de la TERT, pero este enfoque carece de la selectividad deseada de muchos otros enfoques. Los compuestos sintéticos pequeños no nucleosídicos pueden ser muy eficaces para inhibir la actividad catalítica del componente de proteína TERT, como se describe en el capítulo 6. Un compuesto que se ha mostrado prometedor en este sentido es BIBR1532 que inhibe la processividad in vitro de la telomerasa. La inhibición de la actividad de TERT con BIBR1532 se produce de manera dependiente de la dosis, y concentraciones más altas de este inhibidor de la telomerasa pueden ser citotóxicas para las células cancerosas del sistema hematopoyético, como las células HL-60, con poco efecto en las células normales.

Los abordajes inmunoterapéuticos anticancerosos también se han centrado en la TERT (ver capítulo 7). Estos métodos implican el uso de péptidos derivados de TERT. Los péptidos se presentan por moléculas de clase I del complejo de histocompatibilidad mayor (MHC) a los linfocitos T. El resultado es que los linfocitos T citotóxicos CD8+, específicos para los péptidos antigénicos derivados de TERT, lisan células cancerosas que expresan TERT. Estos abordajes inmunoterapéuticos dirigidos contra epítopos de TERT se pueden llevar a cabo en ausencia de toxicidad y se muestran muy prometedores como agentes anticancerígenos.

Identificar compuestos de moléculas pequeñas que afectan la expresión de TERT puede ser un desafío, y el uso de sistemas de reporteros basados en células para el análisis de la expresión de TERT se ha desarrollado para mejorar estos esfuerzos, como se describe en el Capítulo 8. Por ejemplo, el promotor TERT se puede vincular a dos genes reporteros diferentes que codifican la proteína fluorescente verde (GFP) y la fosfatasa alcalina secretada (SEAP). La transfección de estos constructos de reportero da como resultado clones estables que permiten el análisis de la expresión TERT. En última instancia, el objetivo de muchos abordajes contra el cáncer es lograr cierto nivel de inhibición de la TERT, y los capítulos 2 a 8 proporcionan muchos de los métodos más prometedores y eficaces para derribar activamente el transcripción de la TERT, ablar su actividad catalítica, dirigir el sistema inmunitario para lisar células cancerosas con telomerasa positiva o usar constructos de expresión para identificar componentes de moléculas pequeñas que afectan la expresión de la telomerasa.

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