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Metodi di inibizione della telomerasi | Selva's website

4.1. Metodi di inibizione della subunità catalitica TERT della telomerasi

La subunità catalitica TERT è stata un obiettivo importante per lo sviluppo di metodi antitumorali a causa dell’elevata concentrazione di TERT in quasi tutte le cellule tumorali, della dipendenza della maggior parte delle cellule tumorali dall’attività TERT e della scarsità di TERT nella maggior parte delle cellule normali. L’approccio di trascrizione knockdown ha utilizzato oligodeossiribonucleotidi antisenso come pilastro, mentre i progressi più recenti hanno fatto affidamento su molecole di RNA a piccola interferenza (siRNA). Entrambe queste tecniche comprendono gli acidi nucleici sintetici che possono legarsi agli obiettivi specifici del mRNA ed entrambi sono stati efficaci negli approcci antitumorali all’espressione di TERT di knockdown come descritto nel capitolo 2. L’uso di RNA a doppio filamento (dsRNA) è stato anche molto efficace nell’ablazione o nella riduzione notevolmente dei trascritti da geni come TERT (vedere Capitolo 3). Queste sequenze di dsRNA possono essere usate per generare una risposta di RNAi in celle di origine embrionale quali le cellule embrionali umane del rene (HEK), un tipo popolare delle cellule utilizzato nella ricerca del cancro. Questa tecnica è particolarmente efficace per le analisi a breve termine di TERT knockdown perché il dsRNA è degradato nelle cellule a lungo termine. RNAi di TERT ha anche avuto successo con l’uso di costrutti plasmidici che esprimono in modo esogeno brevi sequenze di RNA tornante complementari alla trascrizione di TERT. Questa tecnica (vedi Capitolo 4) permette l’analisi degli effetti a valle di TERT, serve come un approccio alternativo alla terapia genica utilizzando vettori virali, e permette a lungo termine e permanente gene knockdown. Efficace anche per l’abbattimento a lungo termine di TERT è l’uso di vettori retrovirali che esprimono RNA tornante corto specifico per un segmento della trascrizione TERT. Questa tecnica basata su RNAi (vedi Capitolo 5) comporta l’incorporazione della sequenza anti-telomerasi nel genoma ospite e può fornire un efficace knockdown di TERT.

Piccole molecole come 3′-azido-2′, 3′-dideossitimina (AZT), che è un analogo nucleosidico, possono essere efficaci nel targeting del sito attivo di TERT, ma questo approccio manca della selettività desiderata di molti altri approcci. Piccoli composti sintetici non nucleosidici possono essere molto efficaci nell’inibire l’attività catalitica della componente proteica TERZ come descritto nel capitolo 6. Un composto che ha mostrato la promessa a questo proposito è BIBR1532 che inibisce la processività in vitro della telomerasi. L’inibizione dell’attività TERZ con BIBR1532 si verifica in modo dose-dipendente e concentrazioni più elevate di questo inibitore della telomerasi possono essere citotossiche per le cellule tumorali del sistema ematopoietico come le cellule HL-60 con scarso effetto sulle cellule normali.

Anche gli approcci immunoterapici antitumorali si sono concentrati sulla TERT (vedi Capitolo 7). Questi metodi comportano l’uso di peptidi derivati da TERT. I peptidi sono presentati dalle principali molecole di classe I del complesso di istocompatibilità (MHC) ai linfociti T. Il risultato è che i linfociti T citotossici CD8 + specifici per i peptidi antigenici derivati da TERT lisano le cellule tumorali che esprimono TERT. Questi approcci immunoterapeutici diretti contro gli epitopi TERT possono essere eseguiti in assenza di tossicità e stanno mostrando grandi promesse come agenti antitumorali.

Può essere una sfida identificare composti di piccole molecole che influenzano l’espressione di TERT e l’uso di sistemi reporter basati su cellule per l’analisi dell’espressione di TERT è stato sviluppato per migliorare questi sforzi come descritto nel Capitolo 8. Ad esempio, il promotore TERT può essere collegato a due diversi geni reporter che codificano la proteina fluorescente verde (GFP) e la fosfatasi alcalina secreta (SEAP). La trasfezione di questi costrutti reporter produce cloni stabili che consentono l’analisi dell’espressione TERT. In definitiva, un certo grado di inibizione di TERZ è l’obiettivo di molti antitumorali approcci, e i Capitoli 2-8 fornire molti dei più promettenti ed efficaci metodi attivamente per abbattere il TERZ trascrizione, ablazione sua attività catalitica, orientando il sistema immunitario per lisare telomerasi cellule di cancro positivo, o l’utilizzo di costrutti di espressione per identificare piccole molecole componenti che influenzano l’espressione della telomerasi.

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