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テロメラーゼ阻害の方法 | Selva's website

4.1. テロメラーゼのTert触媒サブユニットを阻害する方法

TERT触媒サブユニットは、ほぼすべての癌細胞におけるTERTの高濃度、ほとんどの癌細胞のtert活性への依存性、およびほとんどの正常細胞におけるTERTの希少性のために、抗癌法の開発の主要な標的となっている。 新しい進歩は、低干渉RNA(siRNA)分子に依存しているのに対し、トランスクリプトノックダウンのアプローチは、主力としてアンチセンスオリゴデオキシリボ これらの技術は両方とも、特定のmRNA標的に結合することができる合成核酸を含み、両方とも、第2章に記載されるように、tert発現をノックダウンする抗癌アプローチにおいて有効であった。 二本鎖RNA(dsRNA)の使用はまた、TERTなどの遺伝子からの転写物を切除または大幅に減少させるのに非常に有効であった(第3章参照)。 これらのdsRNA配列は、癌研究で使用される一般的な細胞型であるヒト胚性腎臓(HEK)細胞などの胚起源の細胞においてRnai応答を生成するために使用され この技術は、dsRNAが細胞内で長期的に分解されるため、TERTノックダウンの短期分析に特に有効である。 TERTのRNAiは、TERT転写物に相補的な短いヘアピンRNA配列を外因的に発現するプラスミド構築物の使用にも成功している。 この技術(第4章を参照)は、tertの下流の効果の分析を可能にし、ウイルスベクターを用いた遺伝子治療への代替アプローチとして機能し、長期的かつ永続的 また、TERTの長期ノックダウンに有効なのは、TERT転写産物のセグメントに特異的な短いヘアピンRNAを発現するレトロウイルスベクターの使用である。 このRNAiベースの技術(第5章を参照)は、宿主ゲノムへの抗テロメラーゼ配列の取り込みを含み、TERTの効果的なノックダウンを提供することができる。

ヌクレオシド類似体である3′-アジド-2′,3′-ジデオキシチミン(AZT)のような小分子は、TERTの活性部位を標的にするのに有効であるが、このアプローチは他の多くのアプローチの所望の選択性を欠いている。 小さな非ヌクレオシド合成化合物は、第6章に記載されているように、TERTタンパク質成分の触媒活性を阻害するのに非常に効果的であり得る。 この点で約束を示している一つの化合物は、テロメラーゼのin vitro processivityを阻害するBIBR1532です。 BIBR1532によるTERT活性の阻害は用量依存的に起こり、このテロメラーゼ阻害剤の高濃度は、hl-60細胞などの造血系の癌細胞に対して細胞傷害性であり、正常細胞

抗がん免疫療法のアプローチもTERTに焦点を当てている(第7章参照)。 これらの方法は、TERT由来のペプチドの使用を含む。 ペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体(MHC)クラスI分子によってTリンパ球に提示される。 その結果、TERT由来抗原ペプチドに特異的なCD8+細胞傷害性Tリンパ球は、TERTを発現する癌細胞を溶解する。 TERTエピトープに対するこれらの免疫療法アプローチは、毒性の非存在下で実施することができ、抗癌剤として大きな約束を示している。

TERTの発現に影響を与える小分子化合物を同定することは困難であり、第8章に記載されているように、これらの努力を強化するために、TERT発現の解析に細胞ベースのレポーターシステムを使用することが開発されている。 例えば、TERTプロモーターは、緑色蛍光タンパク質(GFP)および分泌アルカリホスファターゼ(SEAP)をコードする二つの異なるレポーター遺伝子に連結することができる。 これらのレポーターの構造物のtransfectionはTERTの表現の分析を可能にする安定したクローンで起因する。 最終的には、TERTの阻害のいくつかのレベルは、多くの抗癌アプローチの目標であり、第2-8章では、積極的にtert転写産物をノックダウンし、その触媒活性を切除し、テロメラーゼ陽性癌細胞を溶解するために免疫系を向ける、またはテロメラーゼの発現に影響を与える小分子成分を同定するために発現構築物を使用するための最も有望で効果的な方法の多くを提供しています。

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