Articles

Metody hamowania telomerazy | Selva's website

4.1. Metody hamowania katalitycznej podjednostki tert telomerazy

katalityczna podjednostka tert była głównym celem rozwoju metod przeciwnowotworowych ze względu na wysokie stężenie TERT w prawie wszystkich komórkach nowotworowych, zależność większości komórek nowotworowych od aktywności TERT i niedobór TERT w większości normalnych komórek. Podejście knockdown transkryptu wykorzystuje antysensowne oligodeoksyrybonukleotydy jako podstawę, podczas gdy nowsze postępy opierały się na cząsteczkach RNA o małym interferującym RNA (siRNA). Obie te techniki obejmują syntetyczne kwasy nukleinowe, które mogą wiązać się ze specyficznymi celami mRNA i obie były skuteczne w podejściach przeciwnowotworowych do ekspresji tert knockdown, jak opisano w rozdziale 2. Zastosowanie dwuniciowego RNA (dsRNA) było również dość skuteczne w ablacji lub znacznym zmniejszeniu transkryptów z genów takich jak TERT (patrz rozdział 3). Te sekwencje dsRNA mogą być wykorzystane do wygenerowania odpowiedzi RNAi w komórkach pochodzenia embrionalnego, takich jak komórki ludzkiej nerki embrionalnej (HEK), popularnego typu komórki używanego w badaniach nad rakiem. Technika ta jest szczególnie skuteczna w krótkoterminowych analizach TERT-butylu, ponieważ dsRNA ulega degradacji w komórkach w dłuższej perspektywie. RNAi TERT również odnosił sukces dzięki zastosowaniu plazmidowych konstruktów, które egzogennie wyrażają krótkie spinki do włosów sekwencje RNA komplementarne do transkryptu TERT. Technika ta (patrz rozdział 4) umożliwia analizę dalszych efektów TERT, służy jako alternatywne podejście do terapii genowej z wykorzystaniem wektorów wirusowych i umożliwia długotrwałe i trwałe znokautowanie genów. Również skuteczne dla długotrwałego knockdown TERT jest użycie wektorów retrowirusowych, które wyrażają krótkie spinki RNA specyficzne dla segmentu transkryptu TERT. Ta technika oparta na RNAi (patrz rozdział 5) obejmuje włączenie sekwencji anty-telomerazy do genomu gospodarza i może zapewnić skuteczne knockdown TERT.

małe cząsteczki, takie jak 3′-azydo-2′, 3 ’ – dideoksytymina (AZT), która jest analogiem nukleozydów, mogą być skuteczne w celowaniu w aktywne miejsce TERT, ale takie podejście nie ma pożądanej selektywności wielu innych podejść. Małe nienukleozydowe związki syntetyczne mogą być dość skuteczne w hamowaniu aktywności katalitycznej składnika białka TERT, jak opisano w rozdziale 6. Jednym ze związków, który okazał się obiecujący w tym względzie, jest BIBR1532, który hamuje processywność telomerazy in vitro. Hamowanie aktywności TERT z BIBR1532 występuje w sposób zależny od dawki, a wyższe stężenia tego inhibitora telomerazy mogą być cytotoksyczne dla komórek nowotworowych układu krwiotwórczego, takich jak komórki HL-60, z niewielkim wpływem na normalne komórki.

przeciwnowotworowe metody immunoterapeutyczne również koncentrowały się na TERT (patrz rozdział 7). Metody te obejmują zastosowanie peptydów pochodzących z TERT. Peptydy są prezentowane przez główne cząsteczki kompleksu zgodności histologicznej (MHC) klasy i limfocytom T. W rezultacie limfocyty T cytotoksyczne CD8 + specyficzne dla peptydów antygenowych pochodzących z TERT lizują komórki nowotworowe, które wyrażają TERT. Te immunoterapeutyczne podejścia skierowane przeciwko epitopom TERT mogą być przeprowadzane w przypadku braku toksyczności i wykazują wielką obietnicę jako środki przeciwnowotworowe.

zidentyfikowanie związków małocząsteczkowych, które wpływają na ekspresję TERT, może stanowić wyzwanie, a wykorzystanie komórkowych systemów reporterowych do analizy ekspresji TERT zostało opracowane w celu zwiększenia tych wysiłków, jak opisano w rozdziale 8. Na przykład promotor TERT może być połączony z dwoma różnymi genami reporterowymi kodującymi zielone białko fluorescencyjne (GFP) i wydzielaną fosfatazę alkaliczną (SEAP). Transfekcja tych konstruktów reporterowych skutkuje stabilnymi klonami, które umożliwiają analizę ekspresji TERT. Ostatecznie, pewien poziom hamowania TERT jest celem wielu podejść przeciwnowotworowych, a rozdziały 2-8 dostarczają wielu najbardziej obiecujących i skutecznych metod aktywnego burzenia transkryptu TERT, ablacji jego aktywności katalitycznej, kierowania układu odpornościowego do lizy telomerazy-dodatnich komórek nowotworowych lub używania konstruktów ekspresyjnych do identyfikacji składników małocząsteczkowych, które wpływają na ekspresję telomerazy.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.