Articles

Metode de inhibare a telomerazei | Selva's website

4.1. Metode de inhibare a subunității catalitice TERT a telomerazei

subunitatea catalitică TERT a fost o țintă majoră pentru dezvoltarea metodelor anticanceroase datorită concentrației ridicate de TERT în aproape toate celulele canceroase, dependenței majorității celulelor canceroase de activitatea TERT și deficitului de TERT în majoritatea celulelor normale. Abordarea transcript knockdown a folosit oligodeoxiribonucleotide antisens ca suport, în timp ce progresele mai noi s-au bazat pe molecule de ARN cu interferență mică (siARN). Ambele tehnici implică acizi nucleici sintetici care se pot lega de ținte specifice de ARNm și ambele au fost eficiente în abordările anticanceroase pentru a elimina expresia TERT așa cum este descris în Capitolul 2. Utilizarea ARN dublu catenar (dsRNA) a fost, de asemenea, destul de eficientă în ablarea sau reducerea semnificativă a transcrierilor din gene precum terț (vezi capitolul 3). Aceste secvențe dsRNA pot fi utilizate pentru a genera un răspuns RNAi în celulele de origine embrionară, cum ar fi celulele renale embrionare umane (HEK), un tip de celule populare utilizate în cercetarea cancerului. Această tehnică este deosebit de eficientă pentru analizele pe termen scurt ale TERT knockdown, deoarece dsRNA este degradat în celule pe termen lung. RNAi al TERT a avut, de asemenea, succes cu utilizarea constructelor plasmidice care exprimă exogen secvențe scurte de ARN ac de păr complementare transcrierii TERT. Această tehnică (vezi capitolul 4) permite analiza efectelor din aval ale TERT, servește ca o abordare alternativă a terapiei genice folosind vectori virali și permite eliminarea genelor pe termen lung și permanent. De asemenea, eficient pentru eliminarea pe termen lung a TERT este utilizarea vectorilor retrovirali care exprimă ARN de ac de păr scurt specific unui segment al transcrierii TERT. Această tehnică bazată pe RNAi (vezi capitolul 5) implică încorporarea secvenței anti-telomerazei în genomul gazdă și poate oferi o eliminare eficientă a TERT.

molecule mici, cum ar fi 3′-azido-2′, 3′-dideoxitimina (AZT), care este un analog nucleozidic, pot fi eficiente în direcționarea situsului activ al TERT, dar această abordare nu are selectivitatea dorită a multor alte abordări. Compușii sintetici non-nucleozidici mici pot fi destul de eficienți în inhibarea activității catalitice a componentei proteinei terț așa cum este descris în Capitolul 6. Un compus care a demonstrat promisiune în acest sens este BIBR1532 care inhibă procesivitatea in vitro a telomerazei. Inhibarea activității TERT cu BIBR1532 are loc într-o manieră dependentă de doză, iar concentrațiile mai mari ale acestui inhibitor de telomerază pot fi citotoxice pentru celulele canceroase ale sistemului hematopoietic, cum ar fi celulele HL-60, cu efect redus asupra celulelor normale.

abordările imunoterapeutice anticanceroase s-au concentrat, de asemenea, pe TERT (vezi capitolul 7). Aceste metode implică utilizarea peptidelor derivate din terț. Peptidele sunt prezentate de complexul major de histocompatibilitate (MHC) clasa I molecule la limfocitele T. Rezultatul este că limfocitele T citotoxice CD8 + specifice peptidelor antigenice derivate din terț lizează celulele canceroase care exprimă terț. Aceste abordări imunoterapeutice îndreptate împotriva EPITOPILOR terți pot fi efectuate în absența toxicității și prezintă o mare promisiune ca agenți anticanceroși.

poate fi o provocare identificarea compușilor cu molecule mici care afectează expresia TERT, iar utilizarea sistemelor reporter bazate pe celule pentru analiza expresiei TERT a fost dezvoltată pentru a spori aceste eforturi așa cum este descris în Capitolul 8. De exemplu, promotorul terț poate fi legat de două gene reporter diferite care codifică proteina fluorescentă verde (GFP) și fosfataza alcalină secretată (SEAP). Transfecția acestor construcții reporter are ca rezultat clone stabile care permit analiza expresiei terț. În cele din urmă, un anumit nivel de inhibare a TERT este scopul multor abordări anticanceroase, iar capitolele 2-8 oferă multe dintre cele mai promițătoare și eficiente metode pentru doborârea activă a transcrierii TERT, ablarea activității sale catalitice, direcționarea sistemului imunitar către celulele canceroase pozitive la telomerază sau utilizarea constructelor de Expresie pentru a identifica componentele moleculelor mici care afectează expresia telomerazei.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.